Что такое Иммуноферментный анализ (ELISA), основные виды и отличия — Bialexa

Elisa анализ крови

ИФА (ELISA) – иммуноферментный анализ – лабораторное исследование, позволяющее определить присутствие в крови ВИЧ-антител; тест на ВИЧ-антитела.

ВИЧ: диагностика методом ИФА

К числу наиболее апробированных непрямых методов диагностики ВИЧ- инфекции относится метод, позволяющий обнаруживать в организме не сам ВИЧ, а антитела к его антигенам, которые появляются в крови у ВИЧ- инфицированных пациентов. Иммунная система организма почти сразу реагирует на присутствие ВИЧ, выпуская против него антитела, их и пытаются в первую очередь обнаружить медики, используя специальные диагностикумы (тест-системы), основанные на иммуноферментном анализе (ИФА).

В этом анализе используется два типа реакций: иммунологическая и ферментативная.

Все вариации ИФА основаны на способности антител специфически взаимодействовать только с «собственными» антигенами, т.е. на иммунологической реакции «антиген-антитело».

Наибольшее распространение получил гетерогенный вариант иммуноферментного анализа, при котором антиген (определяемое соединение) или антитела фиксируется на твердой основе, в качестве которой могут выступать полистироловый планшет, полистироловые бусины, пористая подложка или магнитный носитель. Анализ проводят в 3 стадии (рис. ). В лунку планшета, содержащую на своих стенках тот или иной антиген (т.е. один из белков вируса), добавляют исследуемый биологический материал — сыворотку крови больного. При наличии в организме инфекционного агента, в сыворотке появляются антитела к нему. Они прочно связываются с антигеном и не удаляются при последующей промывке чашки.

На следующем этапе необходимо определить, образовался или нет в лунке иммунный комплекс, то есть произошло ли соединение антигена с антителом. Простым глазом или под микроскопом это нельзя увидеть, поэтому требуются следующие две стадии, которые можно назвать проявляющими.

На второй стадии анализа в лунку вносят специальные (реагирующие с разными антителами) антитела с заранее прикрепленным к ним ферментом (поэтому метод называется ферментным). Слитый в единый комплекс «антитело-фермент» (конъюгат) способен связаться с антителами, уже зацепившимися за антиген, который закреплен на твердой подложке. В результате возникает «молекулярная цепочка», на одном конце которой вирусный белок, а на другом — фермент. После отмывки весь этот многослойный «пирог» остается в лунке планшета. Теперь нужно обнаружить активность фермента, чтобы сделать вывод о наличие антитела. Для этого на третьей стадии в ту же лунку вносят раствор субстрата и специального бесцветного вещества — хромогена, который способен окрашиваться в результате серии биохимических реакций, осуществляемых присутствующим в лунке ферментом. Если в лунке появляется окраска, это означает, что все элементы цепочки присутствуют. Из этого следует вывод: в крови пациента имеются антитела к антигенам ВИЧ и, следовательно, сам пациент инфицирован этим вирусом.

Читайте также:  Очищение кишечника кефиром особенности и эффективность

Существуют и другие варианты метода ИФА. Например, можно детектировать не антитела, а сам антиген. Процедура в целом будет похожей, хотя немного более сложной.

Так как ВИЧ-инфекция длится пожизненно, то для диагностики достаточно самого факта обнаружения антител на любом этапе развития заболевания. Обнаружение антител с помощью ИФА является очень чувствительным методом, который выявляет свыше 99% ВИЧ-инфицированных.

Для проведения ИФА необходимо осуществить несколько операций. (А) На первом этапе к антигену, сорбированному на твердой поверхности (1), добавляют сыворотку крови, содержащую антитело (2). Затем в лунку вносят неспецифические антитела, слитые с ферментом (такой комплекс называют коньюгатом) (3). На конечном этапе (4) в ту же лунку вносят способное окрашиваться вещество — хромоген. Если образуется комплекс-«пирог» (Б), то хромоген под действием фермента расщепляется и появляется окраска. Это означает, что все элементы цепочки присутствуют, «пирог» испекся, и результат тестирования антител положительный.

Elisa анализ крови

ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) — это диагностический in vitro тест, основанный на методе иммуноферментного анализа (ИФА).
В результате исследования с помощью ELISA получают качественный результат тестирования.

Принцип действия

В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом. Среди различных модификаций ИФА наибольшее распространение получил метод двойного связывания, обычно используемый в серодиагностике инфекций.

В методе двойного связывания первая реакция происходит между определяемым Ig и очищенным антигеном возбудителя, фиксированным к поверхности лунок иммунологического планшета. После завершения первой реакции планшет отмывается. При этом несвязавшиеся компоненты исследуемой пробы удаляются, а на стенках лунок остается комплекс антиген-антитело. Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вторую иммунологичесую реакцию, в которой в качестве антигена выступает связавшийся специфический Ig, а в качестве антител к нему — коньюгат, представляющий собой Ig (например, кроличий) к соответствующему Ig человека, меченный ферментом (обычно пероксидазой). После завершения второй иммунологической реакции следует отмывка лунок планшета от избытка коньюгата и далее — третий этап — ферментативная реакция, катализируемая ферментной частью молекулы коньюгата. Субстратом данной реакции служит бесцветное вещество — хромоген (орто-фенилендиамин, ОФД или тетраметилбензидин, ТМБ), который в ходе реакции образует окрашенное вещество. Интенсивность окраски в лунке определенным образом зависит от количества содержащихся в пробе Ig. После остановки ферментативной реакции проводят фотометрирование лунок. Далее с учетом значений оптической плотности контрольных проб проводят математическую обработку результатов анализа. В общем случае, чем выше оптическая плотность в данной лунке, тем большее количество специфических антител содержалось в соответствующей пробе и, следовательно, выше титр анализируемой сыворотки. При отсутствии в сыворотке исследуемых антител лунки остаются неокрашенными.

Типы тестов ELISA

LG Anti-HIV 1/2 Plus ELISA

Читайте также:  Сиалоаденит (воспаление слюнных желез) - лечение, симптомы

Диагностический тест-набор для определения антител и антигенов к вирусу иммунодефицита человека.

LG HIV Ag-Ab Plus

Диагностический тест-набор для определения антител и антигенов к вирусу иммунодефицита человека.

Genedia HIV 1/2 ELISA 3.0

Тест для качественного определения антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке и плазме человека.

Genedia HIV Ag — Ab ELISA

Тест для качественного определения антител к ВИЧ-1, ВИЧ-1 группы 0, ВИЧ-2 и антигенов ВИЧ-1 в сыворотке и плазме человека.

Know NOW (НОУ НАУ) — УЗНАЙ СЕЙЧАС!

(495) 22-939-88


Уже в продаже!
Автоматические ланцеты MediSafe Solo
наилучшее качество по наименьшей цене

самые свежие новости — звоните!





ООО Компания «Салюта»

Телефон / факс:
(495) 22-939-88

отправить e-mail

Anti-HCV, антитела, ИФА

Anti-HCV – специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С, свидетельствующие о возможной инфицированности или ранее перенесенной инфекции.

Суммарные антитела к вирусу гепатита С.

Синонимы английские

Antibodies to Hepatitis C Virus, IgM, IgG; HCVAb, Total.

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (при переливании элементов крови и плазмы, пересадке донорских органов, через нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятна передача вируса при половом контакте и от матери ребенку во время родов, но это происходит реже.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро, с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса, редко оно сопровождается желтухой. У 60-85 % зараженных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Для хронического вирусного гепатита С характерна «волнообразность» с повышением печеночных ферментов и слабовыраженными симптомами. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Специфические иммуноглобулины вырабатываются к ядру вируса (нуклеокапсидному белку core), оболочке вируса (нуклеопротеинам Е1-Е2) и фрагментам генома вируса гепатита С (неструктурным белкам NS). У большинства больных ВГС первые антитела появляются через 1-3 месяца после инфицирования, но иногда могут отсутствовать в крови больше года. В 5 % случаев антитела к вирусу так никогда и не обнаруживаются. При этом о ВГC будет свидетельствовать выявление суммарных антител к антигенам вируса гепатита С.

Читайте также:  О полезных (и не очень) свойствах кокоса для будущих мам

В острый период болезни образуются антитела классов IgM и IgG к нуклеокапсидному белку core. В период латентного течения инфекции и при ее реактивации в крови присутствуют антитела класса IgG к неструктурным белкам NS и нуклеокапсидному белку core.

После перенесенной инфекции специфические иммуноглобулины циркулируют в крови 8-10 лет с постепенным снижением концентрации или сохраняются пожизненно в очень низких титрах. Они не защищают от вирусной инфекции и не снижают риска повторного заражения и развития заболевания.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики вирусного гепатита С.
  • Для дифференциальной диагностики гепатитов.
  • Для выявления ранее перенесенного вирусного гепатита С.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах вирусного гепатита и повышении уровня печеночных трансаминаз.
  • Если известно о перенесенном гепатите неуточненной этиологии.
  • При обследовании людей из группы риска по заражению вирусным гепатитом С.
  • При скрининговых обследованиях.

Что означают результаты?

Отношение S/CO (signal/cutoff): 0 — 1.

Причины anti-HCV положительного результата:

  • острый или хронический вирусный гепатит С;
  • ранее перенесенный вирусный гепатит С.

Причины anti-НСV отрицательного результата:

  • отсутствие вируса гепатита С в организме;
  • ранний период после инфицирования;
  • отсутствие антител при вирусном гепатите С (серонегативный вариант, около 5 % случаев).

Что может влиять на результат?

  • Ревматоидный фактор в крови способствует ложноположительному результату.



  • При положительном результате anti-HCV для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С» выполняется тест с определением структурных и неструктурных белков вируса (NS, Core).
  • При имеющихся факторах риска заражения и подозрении на вирусный гепатит С рекомендовано определение РНК вируса в крови методом ПЦР даже при отсутствии специфических антител.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог, гастроэнтеролог, терапевт.

Литература

  • Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3 т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
  • Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. – М.: ООО «МИА», 2006. – 471-476 с.
  • Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
  • Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.
Ссылка на основную публикацию
Что такое Дуоденит Москва
Дуоденит Дуоденит представляет собой воспаление оболочки 12-перстной кишки. Такое заболевание является одним из самых распространённых поражений этого органа, которое хотя...
Что пить на грудном вскармливании, читать, скачать Азбука здоровья
Диета при грудном вскармливании Как бы это странно ни звучало, но при организации грудного вскармливания вовсе не обязательно жестко ограничивать...
Что подарить девочке на 2 года (32 фото) лучший подарок на день рождения для принцессы
Что подарить девочке на 2 года: 52 оригинальные идеи для хорошего подарка К своему второму дню рождения каждая девочка уже...
Что такое запор и как от него избавиться — Лайфхакер
Что срочно делать при запоре Запор — заболевание, связанное с проблемами эвакуации каловых масс из толстого кишечника. Диагноз ставится при...
Adblock detector